放线菌素D和VM-26对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响实

编辑：网络 | 发布时间：2019-12-16 22:12 | 点击次数：0次

目的研究放线菌素D(Actinomycin D，ACTD)和替尼泊苷(Teniposide，VM-26)对大鼠胶质瘤细胞增殖的体内治疗效果。方法将野生型的C6鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑右侧尾状核(对照......

目的研究放线菌素D(ActinomycinD，ACTD)和替尼泊苷(Teniposide，VM26)对大鼠胶质瘤细胞增殖的体内治疗效果。方法将野生型的C6鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑右侧尾状核(对照组10只，空载组10只)，并对鼠脑内已形成的C6胶质瘤分别用ACTD及VM26抗瘤缓释剂瘤区原位注射(治疗组各10只)。观察各组大鼠的一般情况、生存期、肿瘤病理学和磁共振成像(MRI)动态改变，采用PCNA计数、TUNEL法检测肿瘤细胞增殖活性及凋亡。结果对照组及空载组大鼠平均生存期为19.3天，ACTD组6只及VM26组3只大鼠生存期明显延长，存活期超过200天;除因病理检查人为处死各2只外，ACTD组治疗后4周内死亡2只，VM26组5只。MRI检查对照组大鼠脑内有明显瘤灶，治疗组大鼠脑内瘤灶治疗后明显减少或消失，均与病理学检查结果一致，而且治疗组大鼠C6细胞增殖活性降低，大量细胞凋亡，ACTD较VM26显著。ACTD可望成为体内局部应用治疗胶质瘤的优选化疗药物。

我们以往的研究结果表明，放线菌素D(ActinomycinD，ACTD)可显著抑制C6鼠胶质瘤细胞恶性增殖诱导细胞凋亡，在4个不同的浓度对比中ACTD的抑瘤作用均强于替尼泊苷(Teniposide，VM26)，凋亡率在大剂量ACTD时的作用明显优于VM26[1]。为进一步明确二者对恶性胶质瘤化疗疗效，我们研究了C6细胞接种于鼠脑的致瘤性以及对鼠脑内已形成瘤灶的C6胶质瘤应用ACTD及VM26的抗瘤缓释剂瘤区原位治疗的疗效，观察大鼠的一般情况、生存期、肿瘤体积变化以及肿瘤病理组织学与细胞生物学特征变化。

材料与方法

1.1实验材料C6鼠胶质瘤细胞系由中国科学院动物所提供。细胞培养基：DMEM(DulbeccomodifiedeaglemediumGibco，USA)，小牛血清(Hyclone，USA)。主要生化试剂：将消毒后的医用明胶10g加入注射用水50ml，分别加入ACTD0.1g及VM260.5mg，搅拌成半流状，制成抗瘤缓释剂。原位细胞凋亡检测试剂盒(Roche，Germany)，ABC免疫组化试剂盒及抗体(北京中山及其代理的SantaCruz公司)。主要仪器：江湾Ⅰ型脑立体定向仪(第二军医大学生产)，磁共振仪(Advantage1.5TeslaGEMedicalSystems，GECorporation，USA)。实验动物：二级雄性SD大鼠，体重200～300g，共40只，由北京生物制品检定所繁育场提供，其特征已经鉴定。

1.2实验方法

1.2.1C6鼠脑胶质瘤模型的建立C6鼠胶质瘤细胞于含10%小牛血清的DMEM培养液中单层培养。接种细胞量为1.0×106/(10μl·只)。大鼠经10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉后，固定于江湾Ⅰ型脑立体定向仪上，手术暴露颅骨标志，在前囟位置，矢状缝右侧3.0～3.5mm处用牙钻钻孔，孔径1.2mm，用微量注射器垂直穿刺右尾状核，将细胞悬液缓慢注入。

1.2.2实验动物分组及组织标本采集颅内实验运动分为4组，每组各10只SD大鼠：(1)对照组：接种野生型C6鼠胶质瘤细胞;(2)空载缓释剂组：接种野生型C6鼠胶质瘤细胞后瘤体多点注射半流状医用明胶;(3)ACTD治疗组：治疗组C6鼠胶质瘤细胞种植后第5天，MRI证实有肿瘤形成时，分别于第6、28天按上述方法麻醉、固定动物;同时将制备好的ACTD抗瘤缓释剂原位多点注入瘤体;(4)VM26治疗组：治疗组C6鼠胶质瘤细胞种植后第5天，MRI证实有肿瘤形成时，分别于第6天按上述方法麻醉、固定动物;同时将制备好的VM26抗瘤缓释剂载体原位多点注射入瘤体。接种后28、58天各处死1只，瘤标本做常规HE染色并检测凋亡;其余8只长期观察生存期。

各组实验动物在其自然死亡或人为处死后取出脑组织，将肿瘤标本于10%福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋后冠状切片，行大体标本观察、常规HE染色;另进行PCNA免疫组化染色。另一部分标本用OCT包埋液氮速冻70℃保存冰冻切片，行原位细胞凋亡的检测。

1.2.3MRI成像及检测方法[2]用GE公司1.5TSignaMR机成像，冠状面和矢状面T1WI平扫及增强扫描。根据动物模型对照组生存期规律，本实验的治疗组和空载组各10只大鼠于种植后5天进行全部检测，了解成瘤情况，以便治疗。大鼠种植后1周随机选择4只动物进行检测。以后连续检测各组大鼠的肿瘤生长变化，具体时间为2周、4周、8周、12周。每次检测，除至少选择3只种植后5天或1周已进行检测的动物连续监测外，其他动物则每次选择1～2只轮换进行检测，了解动物成瘤率。

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更新时间：2019-12-17 14:44

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